科研教学

真菌是自然界中一类具有细胞核和细胞器的真核生物。以寄生或腐生菌的形式广泛存在于自然界，已经有近10万种被命名，其中400多种可以对人类致病。近年来，随着我国老龄化的到来，恶性肿瘤的高发、艾滋病的流行、化疗药物、广谱抗生素、糖皮质激素和免疫抑制剂等药物在临床的广泛使用，以及人工导管等侵入性操作技术、器官移植等有创诊疗技术的应用，使得真菌病的发生在临床上越来越多。并且真菌病常常涉及多个科室，临床表现复杂，真菌病感染顽固难愈，易导致误诊误治，因此临床工作中加强真菌病的检测愈显重要。

一、 真菌感染分类

根据真菌感染的部位，通常分为四类，分别为浅表真菌病、皮肤真菌病、皮下组织真菌病和侵袭性真菌病。

二、 检测方法

目前实验室常用的真菌检测方法是直接镜检法（主要为革兰染色涂片镜检及KOH湿片法）、真菌培养法和真菌DNA检测法等。

KOH湿片法操作虽简便、快速、成本低，但阳性率低、准确率低、背景杂质干扰多；革兰氏染色镜检对真菌的分辨能力欠佳，镜下背景比较混乱，真菌孢子和菌丝不易与其他物质区分，且菌丝本身不易着色或着色不匀；分离培养法虽特异性高，能分辨菌属，但培养周期长，取材要求高。

随着科技的快速发展，荧光染色法逐渐兴起，其原理是荧光染色液中的荧光增白剂特异?性结合真菌细胞壁的成分（如几丁质、β-葡聚糖等），在荧光显微镜下荧光标记的真菌能清楚地观察到真菌形态特征，真菌孢子及菌丝立体感明显，与背景反差大，真菌菌丝结构清晰可辨（如下图），显著提高真菌镜检的敏感度。

结果分析：荧光染色法真菌清晰可见，菌丝大小形态清楚，易辨认；而革兰氏染色法尽管也能观察到真菌菌丝，但背景较浅，真菌形态不明显，辨识度不高，容易判断不准。

三、 真菌荧光检测的意义

临床意义：荧光染色液能够与各类真菌细胞壁中的组成成分结合，产生荧光标记，从而定性检测真菌。

适用范围：适用于皮屑、甲屑、毛发、黏膜、耵聍、痰液、肺泡灌洗液、尿液、胸腔积液、阴道分泌物及新鲜或冻存的组织切片等各种标本。本方法尤其对含菌量较少、病原菌仅为孢子的标本，如马拉色菌毛囊炎等，较传统镜检方法具有明显优势。

四、真菌荧光检测开展情况

    一旦怀疑真菌感染，应尽早采集有价值的标本，及时进行标本直接镜检查找真菌。为能快速准确地检测出真菌，更好的服务于临床医生和患者，我们检验科微生物室开展了“真菌免疫荧光检测”。

1． 医嘱名称：真菌荧光染色镜检

2． 标本采集：痰液、肺泡灌洗液、无菌体液（包括脑脊液、胸腹水、关节液等）、组织、尿液、脓液以及毛发、皮屑、指甲等标本。

3． 适用对象：可用于各种真菌检测，如体癣、股癣、手足癣、甲癣、头癣、花斑癣、霉菌性阴道炎、霉菌性肺炎、霉菌性肠炎、鹅口疮等，还可检测部分寄生虫感染性疾病。